(1)標本溶血
由于各種人為原因引起的標本溶血,均可因紅細胞損壞溶解時釋放出很多具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為符號的ELISA測定中,會導致非特異性顯色,攪擾測定成果。為戰勝上述攪擾效果,標本收集時有必要注意避免溶血。
(2)標本受細菌污染
因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶,因而,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產生非特異性顯色而攪擾測定成果。
(3)標本保存不妥
在冰箱中保存過久的標本,血清中IgG可聚組成多聚體、AFP可構成二聚體,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、乃至構成假陽性;標本放置時間過長(如一天以上),有時抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現假陰性。
為戰勝上述攪擾,ELISA測定的血清標本宜為新鮮收集;如不能當即測定,5天內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充沛混合后再測定,但混勻時應輕柔,不行激烈振蕩。
(4)標本凝集不全
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液收集后1/2~2h開端凝結,18~24h*凝結。臨床查驗工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開端凝結時即強行離心別離血清,此刻的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中能夠構成肉眼可見的纖維蛋白塊,易構成假陽性成果;
這類情況于次日復查時因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復查成果變為陰性。為避免上述攪擾效果,處理的辦法是血液標本收集后有必要使其充沛凝結后再別離血清,或標本收集時用帶別離膠的采血管或于采血管中參加適當的促凝劑。
(5)標本管中增加物質的影響
抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性)及快速別離血清的別離膠等均對ELISA測定有一定攪擾效果。
通過以上的剖析和總結,臨床查驗ELISA測定中出現假陽性或假陰性等過錯的成果,掃除ELISA試劑盒要素和操作要素,再有就是從標本要素進行剖析,并應采取相應措施掃除攪擾,從而保證檢測成果的準確性。